01.簡(jiǎn)介

特異性識(shí)別雙鏈DNA中酶切位點(diǎn)，將構(gòu)建好的質(zhì)粒酶切并處理成線性化雙鏈DNA模板，用于下一步mRNA合成。

01.簡(jiǎn)介

以DNA為模板，在體外以RNA聚合酶催化合成mRNA。 體外轉(zhuǎn)錄mRNA的關(guān)鍵酶T7 RNA聚合酶，是高度特異識(shí)別T7啟動(dòng)子序列的DNA依賴的5'→3' RNA聚合酶，以含有T7啟動(dòng)子序列的單鏈或雙鏈DNA為模板、以核苷酸（NTP）為底物，合成并啟動(dòng)下游的單鏈DNA互補(bǔ)的RNA合成。

01.簡(jiǎn)介

在RNA合成過(guò)程中加入無(wú)機(jī)焦磷酸酶，用于增加RNA產(chǎn)量。 無(wú)機(jī)焦磷酸酶通過(guò)催化無(wú)機(jī)焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽，可去除無(wú)機(jī)焦磷酸鹽對(duì)反應(yīng)體系的抑制，同時(shí)為反應(yīng)提供熱力學(xué)動(dòng)力，從而促進(jìn)產(chǎn)物的生成。作為一種良好的輔劑，常用于RNA、DNA、蛋白質(zhì)的生物合成中。同樣用于mRNA疫苗體外大規(guī)模合成中，可提高mRNA產(chǎn)量。

01.簡(jiǎn)介

在 RNA合成結(jié)束后，去除模板DNA。 DNA酶I是一種可消化單鏈或雙鏈DNA產(chǎn)生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的脫氧核糖核酸內(nèi)切酶。它識(shí)別并切割磷酸二酯鍵，產(chǎn)生5'端為磷酸基團(tuán)，3'端為羥基單脫氧核苷酸和寡脫氧核苷酸。

01.簡(jiǎn)介

在 mRNA合成與修飾中加入RNA酶抑制劑，防止RNA降解。 RNA酶抑制劑可與RNA酶抑A形成1：1復(fù)合體，能極強(qiáng)抑制RNA酶，保護(hù)mRNA轉(zhuǎn)錄后不被降解

01.簡(jiǎn)介

在mRNA的5'端加上Cap 0帽結(jié)構(gòu)，再將Cap 0轉(zhuǎn)化為Cap 1結(jié)構(gòu)。 在真核生物中，轉(zhuǎn)錄后的mRNA需要經(jīng)過(guò)加帽加尾修飾，才能形成完整的結(jié)構(gòu)，即在5'端形成一個(gè)帽子結(jié)構(gòu)（Cap 1），3’端形成Poly A尾結(jié)構(gòu)。這一系列的修飾有助于mRNA的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運(yùn)和翻譯。

牛痘病毒加帽酶通過(guò)給轉(zhuǎn)錄合成的mRNA催化加上帽子結(jié)構(gòu)（Cap 0），極大提高了mRNA的穩(wěn)定性和翻譯能力，使mRNA可在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)蛋白，從而避免核酸外切酶等的降解破壞。 Cap 0進(jìn)一步形成cap 1結(jié)構(gòu)需要2’-O甲基轉(zhuǎn)移酶（SAN2022-04）參與，該修飾可以降低RNA在體內(nèi)引起的細(xì)胞先天免疫反應(yīng)。

01.簡(jiǎn)介

在mRNA的5'端加上Cap 0帽結(jié)構(gòu)，再將Cap 0轉(zhuǎn)化為Cap 1結(jié)構(gòu)。 Cap 1結(jié)構(gòu)存在于所有真核生物mRNA，有助于穩(wěn)定mRNA結(jié)構(gòu)和提高翻譯效率。研究表明，體外轉(zhuǎn)錄修飾得到的Cap 1結(jié)構(gòu)mRNA更不容易被免疫系統(tǒng)的RNA感受器（RIG-I）識(shí)別，因此在體內(nèi)引起的細(xì)胞先天免疫反應(yīng)更低。

01.簡(jiǎn)介

在mRNA的3'端加上Poly A尾。

Poly A 尾結(jié)構(gòu)與mRNA的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運(yùn)和翻譯密切相關(guān)。在體外轉(zhuǎn)錄mRNA過(guò)程中， Poly A加尾酶不依賴模板的存在，可以高效催化 ATP 以 AMP 的形式依次摻入到 RNA 的 3′末端，即在 RNA 的 3′末端加多聚 A 尾，最大程度還原體內(nèi)加尾過(guò)程。